Dithiothreitol (DTT), CAS 3483-12-3 एक नवीन प्रकारचे हिरवे मिश्रित पदार्थ

β-mercaptoethanol (β-ME) सारख्या पारंपारिक कमी करणारे एजंट्सच्या तुलनेत, DTT एक सुरक्षित आणि अधिक स्थिर कमी करणारे एजंट मानले जाते.हे केवळ जलीय द्रावणातच स्थिर नाही, तर उच्च तापमान आणि आम्ल-बेस परिस्थितीत त्याचे कमी करणारे गुणधर्म देखील राखते.

डीटीटीचा वापर तुलनेने सोपा आहे.सर्वसाधारणपणे, डीटीटी योग्य बफरमध्ये विरघळली जाते आणि नंतर प्रायोगिक प्रणालीमध्ये जोडली जाते.डीटीटीची इष्टतम एकाग्रता विशिष्ट प्रयोगानुसार निर्धारित करणे आवश्यक आहे आणि सामान्यतः 0.1-1 मिमीच्या श्रेणीमध्ये वापरले जाते.कमी एकाग्रतेमुळे पेशींच्या वाढीवर होणारा प्रतिकूल परिणाम कमी होतो आणि लक्ष्य प्रथिनांच्या अतिप्रमाणामुळे सायटोटॉक्सिसिटी कमी होऊ शकते.उच्च एकाग्रतेमुळे सेल चयापचय भार जास्त होऊ शकतो, ज्यामुळे पेशींची वाढ आणि अभिव्यक्ती कार्यक्षमतेवर परिणाम होतो.

इष्टतम एकाग्रता निश्चित करण्याचा मार्ग वेगवेगळ्या एकाग्रतेवर IPTG इंडक्शन चाचण्या आयोजित करून लक्ष्य प्रोटीनच्या अभिव्यक्ती पातळीचे मूल्यांकन करणे असू शकते.IPTG एकाग्रता (उदा. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, इ.) च्या श्रेणीचा वापर करून लहान-स्केल कल्चर चाचण्या केल्या जाऊ शकतात आणि लक्ष्य प्रोटीनची अभिव्यक्ती पातळी शोधून वेगवेगळ्या एकाग्रतेवरील अभिव्यक्ती प्रभावाचे मूल्यांकन केले जाऊ शकते (उदा. वेस्टर्न डाग किंवा प्रतिदीप्ति शोध).प्रायोगिक परिणामांनुसार, सर्वोत्तम अभिव्यक्ती प्रभावासह एकाग्रता इष्टतम एकाग्रता म्हणून निवडली गेली.

याव्यतिरिक्त, समान प्रायोगिक परिस्थितीत सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या IPTG एकाग्रता श्रेणी समजून घेण्यासाठी तुम्ही संबंधित साहित्य किंवा इतर प्रयोगशाळांच्या अनुभवाचा संदर्भ घेऊ शकता आणि नंतर प्रायोगिक गरजांनुसार अनुकूल आणि समायोजित करू शकता.

हे लक्षात घेणे महत्त्वाचे आहे की विविध अभिव्यक्ती प्रणाली, लक्ष्य प्रथिने आणि प्रायोगिक परिस्थितीनुसार इष्टतम एकाग्रता बदलू शकते, म्हणून केस-दर-केस आधारावर ऑप्टिमाइझ करणे सर्वोत्तम आहे.